Javascript er i øjeblikket deaktiveret i din browser. Når javascript er deaktiveret, vil nogle funktioner på denne hjemmeside ikke fungere.
Registrer dine specifikke oplysninger og specifikke lægemidler af interesse, så matcher vi de oplysninger, du giver, med artikler i vores omfattende database og sender dig en PDF-kopi via e-mail rettidigt.
Kontroller bevægelsen af ​​magnetiske jernoxid-nanopartikler for målrettet levering af cytostatika
Forfatter Toropova Y, Korolev D, Istomina M, Shulmeyster G, Petukhov A, Mishanin V, Gorshkov A, Podyacheva E, Gareev K, Bagrov A, Demidov O.
Yana Toropova,1 Dmitry Korolev,1 Maria Istomina,1,2 Galina Shulmeyster,1 Alexey Petukhov,1,3 Vladimir Mishanin,1 Andrey Gorshkov,4 Ekaterina Podyacheva,1 Kamil Gareev,2 Alexei Bagrov,5 Oleg Demidov6,71 Almazov National Medical Research Center under Det Russiske Føderations Sundhedsministerium, Skt. Petersborg, 197341, Den Russiske Føderation; 2 Skt. Petersborg Elektrotekniske Universitet “LETI”, Skt. Petersborg, 197376, Den Russiske Føderation; 3 Center for Personlig Medicin, Almazov Statens Medicinske Forskningscenter, Det Russiske Føderations Sundhedsministerium, Skt. Petersborg, 197341, Den Russiske Føderation; 4FSBI “Institut for Influenzaforskning opkaldt efter AA Smorodintsev” Det Russiske Føderations Sundhedsministerium, Skt. Petersborg, Den Russiske Føderation; 5 Sechenov Institut for Evolutionær Fysiologi og Biokemi, Det Russiske Videnskabsakademi, Skt. Petersborg, Den Russiske Føderation; 6 RAS Institut for Cytologi, St. Petersborg, 194064, Den Russiske Føderation; 7INSERM U1231, Det Medicinske og Farmaciske Fakultet, Bourgogne-Franche Comté Universitetet i Dijon, Frankrig Kommunikation: Yana ToropovaAlmazov National Medical Research Centre, Den Russiske Føderations Sundhedsministerium, Sankt Petersborg, 197341, Den Russiske Føderation Tlf. +7 981 95264800 4997069 E-mail [email protected] Baggrund: En lovende tilgang til problemet med cytostatisk toksicitet er brugen af ​​magnetiske nanopartikler (MNP) til målrettet lægemiddelafgivelse. Formål: At bruge beregninger til at bestemme de bedste egenskaber ved det magnetiske felt, der styrer MNP'er in vivo, og at evaluere effektiviteten af ​​magnetronafgivelse af MNP'er til musetumorer in vitro og in vivo. (MNPs-ICG) anvendes. In vivo luminescensintensitetsstudier blev udført i tumormus, med og uden et magnetfelt på det pågældende sted. Disse undersøgelser blev udført på et hydrodynamisk stillads udviklet af Institut for Eksperimentel Medicin ved Almazov State Medical Research Center under det russiske sundhedsministerium. Resultat: Brugen af ​​neodymmagneter fremmede den selektive akkumulering af MNP. Et minut efter administration af MNPs-ICG til tumorbærende mus akkumuleres MNPs-ICG hovedsageligt i leveren. I fravær og tilstedeværelse af et magnetfelt indikerer dette dets metaboliske vej. Selvom der blev observeret en stigning i fluorescensen i tumoren i nærvær af et magnetfelt, ændrede fluorescensintensiteten i dyrets lever sig ikke over tid. Konklusion: Denne type MNP, kombineret med den beregnede magnetfeltstyrke, kan danne grundlag for udvikling af magnetisk styret levering af cytostatiske lægemidler til tumorvæv. Nøgleord: fluorescensanalyse, indocyanin, jernoxid-nanopartikler, magnetronlevering af cytostatika, tumormålretning.
Tumorsygdomme er en af ​​de vigtigste dødsårsager på verdensplan. Samtidig eksisterer dynamikken med stigende sygelighed og dødelighed som følge af tumorsygdomme stadig.1 Den kemoterapi, der anvendes i dag, er stadig en af ​​de vigtigste behandlinger for forskellige tumorer. Samtidig er udviklingen af ​​metoder til at reducere den systemiske toksicitet af cytostatika stadig relevant. En lovende metode til at løse dens toksicitetsproblem er at bruge nanoskalabærere til at målrette lægemiddelafgivelsesmetoder, som kan give lokal ophobning af lægemidler i tumorvæv uden at øge deres ophobning i raske organer og væv. 2 Denne metode gør det muligt at forbedre effektiviteten og målretningen af ​​kemoterapeutiske lægemidler på tumorvæv, samtidig med at deres systemiske toksicitet reduceres.
Blandt de forskellige nanopartikler, der overvejes til målrettet levering af cytostatiske midler, er magnetiske nanopartikler (MNP'er) af særlig interesse på grund af deres unikke kemiske, biologiske og magnetiske egenskaber, som sikrer deres alsidighed. Derfor kan magnetiske nanopartikler bruges som et varmesystem til behandling af tumorer med hypertermi (magnetisk hypertermi). De kan også bruges som diagnostiske midler (magnetisk resonansdiagnose). 3-5 Ved at bruge disse egenskaber, kombineret med muligheden for MNP-akkumulering i et specifikt område, åbner levering af målrettede farmaceutiske præparater ved hjælp af et eksternt magnetfelt op for skabelsen af ​​et multifunktionelt magnetronsystem til at målrette cytostatika mod tumorstedet. Et sådant system ville omfatte MNP og magnetfelter til at kontrollere deres bevægelse i kroppen. I dette tilfælde kan både eksterne magnetfelter og magnetiske implantater placeret i det kropsområde, der indeholder tumoren, bruges som kilde til magnetfeltet. 6 Den første metode har alvorlige mangler, herunder behovet for at bruge specialudstyr til magnetisk målretning af lægemidler og behovet for at træne personale til at udføre kirurgi. Derudover er denne metode begrænset af høje omkostninger og er kun egnet til "overfladiske" tumorer tæt på kroppens overflade. Den alternative metode med magnetiske implantater udvider anvendelsesområdet for denne teknologi og letter dens anvendelse på tumorer placeret i forskellige dele af kroppen. Både individuelle magneter og magneter integreret i den intraluminale stent kan bruges som implantater til tumorskader i hule organer for at sikre deres åbenhed. Ifølge vores egen upublicerede forskning er disse dog ikke tilstrækkeligt magnetiske til at sikre tilbageholdelse af MNP fra blodbanen.
Effektiviteten af ​​magnetron-lægemiddelafgivelse afhænger af mange faktorer: selve den magnetiske bærers egenskaber og magnetfeltkildens egenskaber (herunder de geometriske parametre for permanente magneter og styrken af ​​det magnetfelt, de genererer). Udviklingen af ​​en succesfuld teknologi til afgivelse af magnetisk styret cellehæmmer bør involvere udvikling af passende magnetiske nanoskala-lægemiddelbærere, vurdering af deres sikkerhed og udvikling af en visualiseringsprotokol, der gør det muligt at spore deres bevægelser i kroppen.
I dette studie beregnede vi matematisk de optimale magnetfeltkarakteristika til at kontrollere den magnetiske nanoskala-lægemiddelbærer i kroppen. Muligheden for at tilbageholde MNP gennem blodkarvæggen under påvirkning af et påført magnetfelt med disse beregningsmæssige karakteristika blev også undersøgt i isolerede rotteblodkar. Derudover syntetiserede vi konjugater af MNP'er og fluorescerende stoffer og udviklede en protokol til deres visualisering in vivo. Under in vivo-forhold, i tumormodelmus, blev akkumuleringseffektiviteten af ​​MNP'er i tumorvæv undersøgt, når de administreres systemisk under påvirkning af et magnetfelt.
I in vitro-studiet anvendte vi reference-MNP'en, og i in vivo-studiet anvendte vi MNP'en belagt med mælkesyrepolyester (polymælkesyre, PLA) indeholdende et fluorescerende middel (indolecyanin; ICG). MNP-ICG er inkluderet i. I dette tilfælde anvendes (MNP-PLA-EDA-ICG).
Syntesen og de fysiske og kemiske egenskaber af MNP er blevet beskrevet detaljeret andetsteds.7,8
For at syntetisere MNP'er-ICG blev PLA-ICG-konjugater først produceret. En racemisk pulverblanding af PLA-D og PLA-L med en molekylvægt på 60 kDa blev anvendt.
Da PLA og ICG begge er syrer, skal man for at syntetisere PLA-ICG-konjugater først syntetisere en aminotermineret spacer på PLA, hvilket hjælper ICG med at kemisorbere til spaceren. Spaceren blev syntetiseret ved hjælp af ethylendiamin (EDA), carbodiimidmetoden og vandopløseligt carbodiimid, 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid (EDAC). PLA-EDA-spaceren syntetiseres som følger. Tilsæt et 20-fold molært overskud af EDA og et 20-fold molært overskud af EDAC til 2 ml 0,1 g/ml PLA-chloroformopløsning. Syntesen blev udført i et 15 ml polypropylen-reagensglas på en ryster ved en hastighed på 300 min-1 i 2 timer. Synteseskemaet er vist i figur 1. Gentag syntesen med et 200-fold overskud af reagenser for at optimere synteseskemaet.
Ved afslutningen af ​​syntesen blev opløsningen centrifugeret ved en hastighed på 3000 min-1 i 5 minutter for at fjerne overskydende udfældede polyethylenderivater. Derefter blev 2 ml af en 0,5 mg/ml ICG-opløsning i dimethylsulfoxid (DMSO) tilsat til 2 ml-opløsningen. Omrøreren fikseres ved en omrøringshastighed på 300 min-1 i 2 timer. Det skematiske diagram af det opnåede konjugat er vist i figur 2.
I 200 mg MNP tilsatte vi 4 mL PLA-EDA-ICG-konjugat. Brug en LS-220 shaker (LOIP, Rusland) til at omrøre suspensionen i 30 minutter med en frekvens på 300 min-1. Derefter blev den vasket med isopropanol tre gange og underkastet magnetisk separation. Brug en UZD-2 Ultrasonic Disperser (FSUE NII TVCH, Rusland) til at tilsætte IPA til suspensionen i 5-10 minutter under kontinuerlig ultralydspåvirkning. Efter den tredje IPA-vask blev bundfaldet vasket med destilleret vand og resuspenderet i fysiologisk saltvand i en koncentration på 2 mg/mL.
ZetaSizer Ultra-udstyret (Malvern Instruments, Storbritannien) blev brugt til at undersøge størrelsesfordelingen af ​​den opnåede MNP i den vandige opløsning. Et transmissionselektronmikroskop (TEM) med en JEM-1400 STEM feltemissionskatode (JEOL, Japan) blev brugt til at undersøge formen og størrelsen af ​​MNP'en.
I denne undersøgelse bruger vi cylindriske permanentmagneter (kvalitet N35; med nikkelbeskyttende belægning) og følgende standardstørrelser (lang akse × cylinderdiameter): 0,5×2 mm, 2×2 mm, 3×2 mm og 5×2 mm.
In vitro-undersøgelsen af ​​MNP-transport i modelsystemet blev udført på et hydrodynamisk stillads udviklet af Institut for Eksperimentel Medicin ved Almazov State Medical Research Center under det russiske sundhedsministerium. Volumenet af den cirkulerende væske (destilleret vand eller Krebs-Henseleit-opløsning) er 225 ml. Aksialt magnetiserede cylindriske magneter anvendes som permanente magneter. Placer magneten på en holder 1,5 mm fra den indre væg af det centrale glasrør, med dens ende vendt mod rørets retning (lodret). Væskens strømningshastighed i det lukkede kredsløb er 60 L/t (svarende til en lineær hastighed på 0,225 m/s). Krebs-Henseleit-opløsning anvendes som en cirkulerende væske, fordi den er en analog af plasma. Plasmas dynamiske viskositetskoefficient er 1,1-1,3 mPa∙s. 9 Mængden af ​​MNP adsorberet i magnetfeltet bestemmes ved spektrofotometri ud fra koncentrationen af ​​jern i den cirkulerende væske efter eksperimentet.
Derudover er der udført eksperimentelle undersøgelser på en forbedret væskemekaniktabel for at bestemme den relative permeabilitet af blodkar. Hovedkomponenterne i den hydrodynamiske støtte er vist i figur 3. Hovedkomponenterne i den hydrodynamiske stent er et lukket kredsløb, der simulerer tværsnittet af modellens vaskulære system, og en lagertank. Bevægelsen af ​​modelvæsken langs konturen af ​​blodkarmodulet sikres af en peristaltisk pumpe. Under eksperimentet opretholdes fordampningen og det nødvendige temperaturområde, og systemparametrene (temperatur, tryk, væskestrømningshastighed og pH-værdi) overvåges.
Figur 3 Blokdiagram over den opsætning, der bruges til at undersøge permeabiliteten af ​​carotisarterievæggen. 1-lagertank, 2-peristaltisk pumpe, 3-mekanisme til indføring af suspension indeholdende MNP i sløjfen, 4-flowmåler, 5-tryksensor i sløjfen, 6-varmeveksler, 7-kammer med beholder, 8-kilde til magnetfeltet, 9-ballon med kulbrinter.
Kammeret, der indeholder beholderen, består af tre beholdere: en ydre stor beholder og to små beholdere, hvorigennem armene på det centrale kredsløb passerer. Kanylen indsættes i den lille beholder, beholderen fastgøres på den lille beholder, og spidsen af ​​kanylen bindes tæt med en tynd tråd. Mellemrummet mellem den store og den lille beholder fyldes med destilleret vand, og temperaturen forbliver konstant på grund af forbindelsen til varmeveksleren. Mellemrummet i den lille beholder fyldes med Krebs-Henseleit-opløsning for at opretholde blodkarcellernes levedygtighed. Tanken fyldes også med Krebs-Henseleit-opløsning. Gasforsyningssystemet (kulstof) bruges til at fordampe opløsningen i den lille beholder i opbevaringstanken og kammeret, der indeholder beholderen (figur 4).
Figur 4 Kammeret, hvor beholderen er placeret. 1-Kanyle til sænkning af blodkarrene, 2-Ydre kammer, 3-Lille kammer. Pilen angiver retningen af ​​modelvæsken.
For at bestemme det relative permeabilitetsindeks for karvæggen blev rotte-carotidarterien anvendt.
Indføringen af ​​MNP-suspension (0,5 ml) i systemet har følgende karakteristika: Det samlede indvendige volumen af ​​tanken og forbindelsesrøret i løkken er 20 ml, og det indvendige volumen af ​​hvert kammer er 120 ml. Den eksterne magnetfeltkilde er en permanentmagnet med en standardstørrelse på 2 × 3 mm. Den er installeret over et af de små kamre, 1 cm fra beholderen, med den ene ende vendt mod beholdervæggen. Temperaturen holdes på 37 °C. Rullepumpens effekt er indstillet til 50 %, hvilket svarer til en hastighed på 17 cm/s. Som kontrol blev der taget prøver i en celle uden permanentmagneter.
En time efter administration af en given koncentration af MNP blev en flydende prøve udtaget fra kammeret. Partikelkoncentrationen blev målt med et spektrofotometer ved hjælp af Unico 2802S UV-Vis spektrofotometer (United Products & Instruments, USA). Under hensyntagen til absorptionsspektret for MNP-suspensionen blev målingen udført ved 450 nm.
I henhold til Rus-LASA-FELASA-retningslinjerne opdrættes og dyrkes alle dyr i specifikke patogenfri faciliteter. Dette studie overholder alle relevante etiske regler for dyreforsøg og -forskning og har opnået etisk godkendelse fra Almazov National Medical Research Center (IACUC). Dyrene drak vand ad libitum og fodredes regelmæssigt.
Undersøgelsen blev udført på 10 bedøvede 12 uger gamle hanlige immundefekte NSG-mus (NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/Szj, Jackson Laboratory, USA)10, der vejede 22 g ± 10%. Da immuniteten hos immundefektmus er undertrykt, tillader immundefektmusene i denne linje transplantation af humane celler og væv uden transplantatafstødning. Kuldsøskende fra forskellige bure blev tilfældigt tildelt forsøgsgruppen, og de blev samavlet eller systematisk eksponeret for strøelse fra andre grupper for at sikre ligelig eksponering for den fælles mikrobiota.
HeLa humane kræftcellelinje bruges til at etablere en xenograftmodel. Cellerne blev dyrket i DMEM indeholdende glutamin (PanEco, Rusland), suppleret med 10% føtalt bovint serum (Hyclone, USA), 100 CFU/ml penicillin og 100 μg/ml streptomycin. Cellelinjen blev venligst stillet til rådighed af Gene Expression Regulation Laboratory ved Institute of Cell Research ved det russiske videnskabsakademi. Før injektion blev HeLa-celler fjernet fra kulturplasten med en 1:1 trypsin:Versene-opløsning (Biolot, Rusland). Efter vask blev cellerne suspenderet i komplet medium til en koncentration på 5×106 celler pr. 200 μL og fortyndet med basalmembranmatrix (LDEV-FREE, MATRIGEL® CORNING®) (1:1, på is). Den fremstillede cellesuspension blev injiceret subkutant i huden på musens lår. Brug elektroniske skydelære til at overvåge tumorvækst hver 3. dag.
Da tumoren nåede 500 mm3, blev en permanent magnet implanteret i forsøgsdyrets muskelvæv nær tumoren. I forsøgsgruppen (MNP'er-ICG + tumor-M) blev 0,1 ml MNP-suspension injiceret og udsat for et magnetfelt. Ubehandlede hele dyr blev brugt som kontrol (baggrund). Derudover blev der brugt dyr injiceret med 0,1 ml MNP, men ikke implanteret med magneter (MNP'er-ICG + tumor-BM).
Fluorescensvisualiseringen af ​​in vivo- og in vitro-prøver blev udført på IVIS Lumina LT serie III bioimager (PerkinElmer Inc., USA). Til in vitro-visualisering blev et volumen på 1 ml syntetisk PLA-EDA-ICG- og MNP-PLA-EDA-ICG-konjugat tilsat pladebrøndene. Under hensyntagen til ICG-farvestoffets fluorescenskarakteristika vælges det bedste filter til at bestemme prøvens lysintensitet: den maksimale excitationsbølgelængde er 745 nm, og emissionsbølgelængden er 815 nm. Living Image 4.5.5-softwaren (PerkinElmer Inc.) blev brugt til kvantitativt at måle fluorescensintensiteten af ​​de brønde, der indeholder konjugatet.
Fluorescensintensiteten og akkumuleringen af ​​MNP-PLA-EDA-ICG-konjugatet blev målt i in vivo tumormodelmus uden tilstedeværelse og anvendelse af et magnetfelt på det pågældende sted. Musene blev bedøvet med isofluran, og derefter blev 0,1 ml MNP-PLA-EDA-ICG-konjugat injiceret gennem halevenen. Ubehandlede mus blev brugt som negativ kontrol for at opnå en fluorescerende baggrund. Efter intravenøs administration af konjugatet placeres dyret på et varmeplatform (37 °C) i kammeret i IVIS Lumina LT serie III fluorescensbilledgiveren (PerkinElmer Inc.), mens inhalation med 2 % isofluranbedøvelse opretholdes. Brug ICG's indbyggede filter (745-815 nm) til signaldetektion 1 minut og 15 minutter efter introduktionen af ​​MNP.
For at vurdere ophobningen af ​​konjugat i tumoren blev dyrets peritoneale område dækket med papir, hvilket gjorde det muligt at eliminere den klare fluorescens, der er forbundet med ophobningen af ​​partikler i leveren. Efter at have undersøgt biodistributionen af ​​MNP-PLA-EDA-ICG, blev dyrene humant aflivet ved en overdosis isoflurananæstesi med henblik på efterfølgende separation af tumorområder og kvantitativ vurdering af fluorescensstråling. Brug Living Image 4.5.5 software (PerkinElmer Inc.) til manuelt at behandle signalanalysen fra det valgte interesseområde. Tre målinger blev foretaget for hvert dyr (n = 9).
I dette studie kvantificerede vi ikke den vellykkede belastning af ICG på MNP'er-ICG. Derudover sammenlignede vi ikke retentionseffektiviteten af ​​nanopartikler under påvirkning af permanente magneter i forskellige former. Derudover evaluerede vi ikke den langsigtede effekt af magnetfeltet på retentionen af ​​nanopartikler i tumorvæv.
Nanopartikler dominerer med en gennemsnitlig størrelse på 195,4 nm. Derudover indeholdt suspensionen agglomerater med en gennemsnitlig størrelse på 1176,0 nm (Figur 5A). Efterfølgende blev portionen filtreret gennem et centrifugalfilter. Partiklernes zetapotentiale er -15,69 mV (Figur 5B).
Figur 5 Suspensionens fysiske egenskaber: (A) partikelstørrelsesfordeling; (B) partikelfordeling ved zetapotentiale; (C) TEM-fotografi af nanopartikler.
Partikelstørrelsen er grundlæggende 200 nm (figur 5C), bestående af en enkelt MNP med en størrelse på 20 nm og en PLA-EDA-ICG-konjugeret organisk skal med en lavere elektrontæthed. Dannelsen af ​​agglomerater i vandige opløsninger kan forklares ved det relativt lave modul af den elektromotoriske kraft i individuelle nanopartikler.
For permanente magneter, når magnetiseringen er koncentreret i volumenet V, opdeles integraludtrykket i to integraler, nemlig volumenet og overfladen:
I tilfælde af en prøve med konstant magnetisering er strømtætheden nul. Udtrykket af den magnetiske induktionsvektor vil da have følgende form:
Brug MATLAB-programmet (MathWorks, Inc., USA) til numerisk beregning, ETU “LETI” akademisk licensnummer 40502181.
Som vist i figur 7, figur 8 og figur 9, genereres det stærkeste magnetfelt af en magnet, der er orienteret aksialt fra cylinderens ende. Den effektive aktionsradius svarer til magnetens geometri. I cylindriske magneter med en cylinder, hvis længde er større end dens diameter, observeres det stærkeste magnetfelt i aksial-radial retning (for den tilsvarende komponent); derfor er et par cylindre med et større aspektforhold (diameter og længde) MNP-adsorption den mest effektive.
Fig. 7 Komponenten af ​​den magnetiske induktionsintensitet Bz langs magnetens Oz-akse; magnetens standardstørrelse: sort linje 0,5×2 mm, blå linje 2×2 mm, grøn linje 3×2 mm, rød linje 5×2 mm.
Figur 8 Den magnetiske induktionskomponent Br er vinkelret på magnetens akse Oz; standardstørrelsen for magneten: sort linje 0,5×2 mm, blå linje 2×2 mm, grøn linje 3×2 mm, rød linje 5×2 mm.
Figur 9 Den magnetiske induktionsintensitets Bz-komponent i afstanden r fra magnetens endeakse (z=0); magnetens standardstørrelse: sort linje 0,5×2 mm, blå linje 2×2 mm, grøn linje 3×2 mm, rød linje 5×2 mm.
Figur 10 Magnetisk induktionskomponent langs radial retning; standard magnetstørrelse: sort linje 0,5×2 mm, blå linje 2×2 mm, grøn linje 3×2 mm, rød linje 5×2 mm.
Specielle hydrodynamiske modeller kan bruges til at studere metoden til MNP-levering til tumorvæv, koncentrere nanopartikler i målområdet og bestemme nanopartiklernes opførsel under hydrodynamiske forhold i kredsløbssystemet. Permanente magneter kan bruges som eksterne magnetfelter. Hvis vi ignorerer den magnetostatiske interaktion mellem nanopartiklerne og ikke tager den magnetiske væskemodel i betragtning, er det tilstrækkeligt at estimere interaktionen mellem magneten og en enkelt nanopartikel med en dipol-dipol-tilnærmelse.
Hvor m er magnetens magnetiske moment, r er radiusvektoren for det punkt, hvor nanopartiklen er placeret, og k er systemfaktoren. I dipolapproksimationen har magnetens felt en lignende konfiguration (figur 11).
I et ensartet magnetfelt roterer nanopartiklerne kun langs kraftlinjerne. I et ikke-ensartet magnetfelt virker kraften på dem:
Hvor er den afledte af en given retning l. Derudover trækker kraften nanopartiklerne ind i de mest ujævne områder af feltet, dvs. krumningen og tætheden af ​​kraftlinjerne øges.
Derfor er det ønskeligt at anvende en tilstrækkelig stærk magnet (eller magnetkæde) med tydelig aksial anisotropi i det område, hvor partiklerne er placeret.
Tabel 1 viser en enkelt magnets evne som en tilstrækkelig magnetfeltkilde til at indfange og tilbageholde MNP i det vaskulære leje af applikationsfeltet.